FK Dukla Praha – 1.SK Prostějov (01.10.2021, 16:00)
Rozhodčí: Michal Křepský – Karel Mikeska, Jakub Bureš
Delegát utkání: Zbyněk Rampáček
Delegát svazový: Radek Příhoda
FC Zbrojovka Brno – AC Sparta Praha B (01.10.2021, 17:00)
Rozhodčí: Tomáš Batík – Radek Kotík, Vít Melichar – Lukáš Raplík
Delegát utkání: Zdeněk Duda
Delegát svazový: Jiří Kureš
FC Vysočina Jihlava – FC MAS Táborsko (01.10.2021, 18:00)
Rozhodčí: Marek Radina – Jakub Šimáček, Petr Líkař
Delegát utkání: Ludvík Urbanec
Delegát svazový: Libor Kovařík
MFK Vyškov – FK Ústí nad Labem (02.10.2021, 10:15)
Rozhodčí: Josef Krejsa – Lukáš Slavíček, Lukáš Machač
Delegát utkání: Petr Vysloužil
Delegát svazový: Antonín Kordula
FK Fotbal Třinec – FK Viktoria Žižkov (02.10.2021, 10:15)
Rozhodčí: Vít Zaoral – Milan Flimmel, Jiří Pečenka
Delegát utkání: František Hubička
Delegát svazový: Michal Beneš
MFK Chrudim – FK Varnsdorf (02.10.2021, 10:15)
Rozhodčí: Ondřej Ginzel – Zdeněk Dobrovolný, Milan Vyhnanovský
Delegát utkání: Kamila Muziková
Delegát svazový: Petr Mikel
Slezský FC Opava – SK Líšeň 2019 (02.10.2021, 18:00)
Rozhodčí: Michael Kvítek – Lucie Ratajová, Jaroslav Poživil
Delegát utkání: Milan Ondo
Delegát svazový: Karel Vidlák
FC Sellier & Bellot Vlašim – 1.FK Příbram (03.10.2021, 16:00)
Rozhodčí: Tomáš Švagr – Michal Pfeifer, Alexandr Černoevič
Delegát utkání: Tomáš Farský
Delegát svazový: Kryštof Mencl