FK Viktoria Žižkov – FK Dukla Praha (24.09.2021, 17:00)
Rozhodčí: Ondřej Cieslar – Jaroslav Poživil, Zdeněk Arnošt – Tomáš Ulrich
Delegát utkání: Martin Hrinko
Delegát svazový: Dušan Pospíšil
FK Ústí nad Labem – FC Zbrojovka Brno (24.09.2021, 18:00)
Rozhodčí: Ondřej Berka – Milan Flimmel, Michal Novák
Delegát utkání: Josef Bajer
Delegát svazový: Luděk Lhoták
1.FK Příbram – MFK Vyškov (25.09.2021, 16:30)
Rozhodčí: Karel Hanousek – Stanislav Pochylý, Vít Melichar
Delegát utkání: Jiří Neuberg
Delegát svazový: Karel Vidlák
SK Líšeň 2019 – FC Vysočina Jihlava (25.09.2021, 16:30)
Rozhodčí: Tomáš Batík – Jiří Pečenka, Lukáš Slavíček
Delegát utkání: Tomáš Farský
Delegát svazový: Ivo Chytil
AC Sparta Praha B – FC Sellier & Bellot Vlašim (26.09.2021, 10:30)
Rozhodčí: Dalibor Černý – Karel Mikeska, Milan Vyhnanovský
Delegát utkání: Petr Vysloužil
Delegát svazový: Libor Zeman
FK Varnsdorf – FK Fotbal Třinec (26.09.2021, 16:30)
Rozhodčí: Lukáš Nehasil – Lucie Ratajová, Alexandr Černoevič
Delegát utkání: Václav Andrejs
Delegát svazový: Pavel Peřina
FC MAS Táborsko – MFK Chrudim (26.09.2021, 16:30)
Rozhodčí: Jan Mayer – Radim Dresler, Lukáš Matoušek
Delegát utkání: František Hubička
Delegát svazový: Tomáš Kovařík
1.SK Prostějov – Slezský FC Opava (26.09.2021, 16:30)
Rozhodčí: Jana Adámková – Jan Váňa, Michal Pfeifer
Delegát utkání: Ludvík Urbanec
Delegát svazový: Radek Kocián