FC Sellier & Bellot Vlašim – 1.SK Prostějov (17.09.2021, 16:30)
Rozhodčí: Tomáš Ulrich – Milan Flimmel, Petr Líkař
Delegát utkání: Miroslav Poklop
Delegát svazový: Petr Mikel
FK Dukla Praha – 1.FK Příbram (17.09.2021, 16:30)
Rozhodčí: Jana Adámková – Lucie Ratajová, Michal Novák – Dalibor Černý
Delegát utkání: Zdeněk Duda
Delegát svazový: Kryštof Mencl
FK Ústí nad Labem – FK Varnsdorf (17.09.2021, 18:00)
Rozhodčí: Zbyněk Proske – Jan Dohnálek, Jakub Bureš
Delegát utkání: František Hubička
Delegát svazový: Jiří Moláček
MFK Vyškov – AC Sparta Praha B (18.09.2021, 10:15)
Rozhodčí: Petr Vít – Zdeněk Dobrovolný, Lukáš Slavíček
Delegát utkání: Radim Adamec
Delegát svazový: Jaroslav Beneš
FK Fotbal Třinec – FC Vysočina Jihlava (18.09.2021, 10:15)
Rozhodčí: Josef Krejsa – Zdeněk Arnošt, Milan Vyhnanovský
Delegát utkání: Jiří Trčka
Delegát svazový: Luděk Lhoták
MFK Chrudim – SK Líšeň 2019 (18.09.2021, 10:15)
Rozhodčí: Tomáš Švagr – Vít Melichar, Petr Kotalík
Delegát utkání: Petr Vysloužil
Delegát svazový: Josef Bábiček
Slezský FC Opava – FC MAS Táborsko (18.09.2021, 15:00)
Rozhodčí: Ondřej Ginzel – Jaroslav Kubr, Michal Volf
Delegát utkání: Václav Andrejs
Delegát svazový: Josef Dvořáček
FC Zbrojovka Brno – FK Viktoria Žižkov (19.09.2021, 20:00)
Rozhodčí: Michal Křepský – Jakub Šimáček, Lukáš Matoušek
Delegát utkání: Milan Ondo
Delegát svazový: Jan Král