1.FK Příbram – FC Zbrojovka Brno (10.09.2021, 17:00)
Rozhodčí: Zbyněk Proske – Petr Kotalík, Jiří Pečenka – Tomáš Švagr
Delegát utkání: Martin Hrinko
Delegát svazový: Josef Bábiček
SK Líšeň 2019 – FK Dukla Praha (10.09.2021, 17:00)
Rozhodčí: Lukáš Machač – Jakub Šimáček, Milan Vyhnanovský
Delegát utkání: Josef Bajer
Delegát svazový: Ladislav Míka
FC Vysočina Jihlava – Slezský FC Opava (10.09.2021, 18:00)
Rozhodčí: Ondřej Cieslar – Lukáš Matoušek, Petr Líkař
Delegát utkání: Zdeněk Rumplík
Delegát svazový: Karel Vidlák
1.SK Prostějov – MFK Chrudim (11.09.2021, 17:00)
Rozhodčí: Marek Radina – Radim Dresler, Jaroslav Poživil
Delegát utkání: Kamila Muziková
Delegát svazový: Josef Dvořáček
FK Viktoria Žižkov – MFK Vyškov (12.09.2021, 10:15)
Rozhodčí: Ladislav Szikszay – Milan Flimmel, Michal Volf
Delegát utkání: Emil Ubias
Delegát svazový: Radek Kocián
AC Sparta Praha B – FK Ústí nad Labem (12.09.2021, 10:30)
Rozhodčí: Tomáš Vychodil – Michal Novák, Alexandr Černoevič
Delegát utkání: Zbyněk Rampáček
Delegát svazový: Libor Kovařík
FK Varnsdorf – FC Sellier & Bellot Vlašim (12.09.2021, 17:00)
Rozhodčí: Lukáš Raplík – Vít Melichar, Lukáš Slavíček
Delegát utkání: Tomáš Farský
Delegát svazový: Petr Hojsík
FC MAS Táborsko – FK Fotbal Třinec (12.09.2021, 17:00)
Rozhodčí: Radek Dubravský – Karel Mikeska, Michal Pfeifer
Delegát utkání: Radim Adamec
Delegát svazový: Pavel Peřina