FK Dukla Praha – Slezský FC Opava (27.08.2021, 17:00)
Rozhodčí: Tomáš Švagr – Vít Melichar, Alexandr Černoevič
Delegát utkání: Emil Ubias
Delegát svazový: Petr Kolbaba
FK Ústí nad Labem – 1.FK Příbram (27.08.2021, 18:00)
Rozhodčí: Petr Dorušák – Zdeněk Arnošt, Lukáš Slavíček – Marek Radina
Delegát utkání: Jiří Neuberg
Delegát svazový: Luděk Lhoták
MFK Vyškov – 1.SK Prostějov (28.08.2021, 10:15)
Rozhodčí: Vít Zaoral – Karel Mikeska, Jakub Bureš
Delegát utkání: Jiří Trčka
Delegát svazový: Ladislav Míka
FK Fotbal Třinec – SK Líšeň 2019 (28.08.2021, 10:15)
Rozhodčí: Karel Hanousek – Lukáš Matoušek, Petr Líkař
Delegát utkání: Zdeněk Rumplík
Delegát svazový: Petr Hojsík
MFK Chrudim – FC Vysočina Jihlava (28.08.2021, 10:15)
Rozhodčí: Michal Křepský – Marek Podaný, Michal Pfeifer
Delegát utkání: Zdeněk Duda
Delegát svazový: Jiří Kureš
AC Sparta Praha B – FC MAS Táborsko (29.08.2021, 10:30)
Rozhodčí: Josef Krejsa – Jakub Šimáček, Milan Vyhnanovský
Delegát utkání: František Hubička
Delegát svazový: Jan Zahradníček
FC Sellier & Bellot Vlašim – FK Viktoria Žižkov (29.08.2021, 17:00)
Rozhodčí: Ondřej Ginzel – Petr Kotalík, Jiří Pečenka
Delegát utkání: Ludvík Urbanec
Delegát svazový: Libor Zeman
FC Zbrojovka Brno – FK Varnsdorf (29.08.2021, 20:00)
Rozhodčí: Tomáš Batík – Zdeněk Dobrovolný, Lukáš Lakomý
Delegát utkání: Michal Tandler
Delegát svazový: Dušan Pospíšil