FC Vysočina Jihlava – FC Sellier & Bellot Vlašim (20.08.2021, 18:00)
Rozhodčí: Ladislav Szikszay – Jakub Šimáček, Michal Volf
Delegát utkání: Martin Hrinko
Delegát svazový: Petr Kolbaba
1.FK Příbram – AC Sparta Praha B (21.08.2021, 17:00)
Rozhodčí: Ondřej Cieslar – Jaroslav Poživil, Petr Líkař
Delegát utkání: Václav Andrejs
Delegát svazový: Jan Král
Slezský FC Opava – MFK Chrudim (21.08.2021, 17:00)
Rozhodčí: Tomáš Ulrich – Milan Flimmel, Milan Vyhnanovský
Delegát utkání: Zdeněk Rumplík
Delegát svazový: Josef Bábiček
1.SK Prostějov – FK Fotbal Třinec (21.08.2021, 17:00)
Rozhodčí: Lukáš Raplík – Zdeněk Arnošt, Lukáš Slavíček
Delegát utkání: Zbyněk Rampáček
Delegát svazový: Dušan Pospíšil
FK Viktoria Žižkov – FK Ústí nad Labem (22.08.2021, 10:15)
Rozhodčí: Dalibor Černý – Karel Mikeska, Alexandr Černoevič
Delegát utkání: František Hubička
Delegát svazový: Petr Hojsík
SK Líšeň 2019 – FC Zbrojovka Brno (22.08.2021, 10:15)
Rozhodčí: Radek Dubravský – Radim Dresler, Jakub Bureš – Michal Křepský
Delegát utkání: Ladislav Kruliš
Delegát svazový: Ivo Chytil
FK Varnsdorf – MFK Vyškov (22.08.2021, 17:00)
Rozhodčí: Petr Hocek – Michal Novák, Lukáš Matoušek
Delegát utkání: Jiří Neuberg
Delegát svazový: Luděk Lhoták
FC MAS Táborsko – FK Dukla Praha (22.08.2021, 17:00)
Rozhodčí: Jakub Vojkovský – Stanislav Pochylý, Jan Dohnálek
Delegát utkání: Milan Ondo
Delegát svazový: Michal Beneš