FC Vysočina Jihlava – FK Dukla Praha (06.08.2021, 18:00)
Rozhodčí: Lukáš Raplík – Jaroslav Poživil, Petr Kotalík
Delegát utkání: Jiří Trčka
Delegát svazový: Jaroslav Beneš
MFK Chrudim – FK Fotbal Třinec (07.08.2021, 10:15)
Rozhodčí: Ondřej Cieslar – Zdeněk Arnošt, Jan Dohnálek
Delegát utkání: Ladislav Kruliš
Delegát svazový: Radek Kocián
Slezský FC Opava – MFK Vyškov (07.08.2021, 17:00)
Rozhodčí: Dalibor Černý – Vít Melichar, Lukáš Lakomý
Delegát utkání: Ludvík Urbanec
Delegát svazový: Josef Bábiček
SK Líšeň 2019 – FK Ústí nad Labem (07.08.2021, 17:00)
Rozhodčí: Tomáš Ulrich – Radek Kotík, Milan Vyhnanovský
Delegát utkání: Zdeněk Duda
Delegát svazový: Dušan Pospíšil
1.SK Prostějov – FC Zbrojovka Brno (07.08.2021, 17:00)
Rozhodčí: Petr Dorušák – Zdeněk Dobrovolný, Michal Pfeifer
Delegát utkání: Michal Tandler
Delegát svazový: Karel Vidlák
FK Viktoria Žižkov – 1.FK Příbram (08.08.2021, 10:15)
Rozhodčí: Jakub Vojkovský – Karel Mikeska, Jakub Bureš
Delegát utkání: Zbyněk Rampáček
Delegát svazový: Libor Kovařík
FK Varnsdorf – AC Sparta Praha B (08.08.2021, 17:00)
Rozhodčí: Ladislav Szikszay – Jiří Pečenka, Michal Volf
Delegát utkání: Michal Brutar
Delegát svazový: Josef Dvořáček
FC MAS Táborsko – FC Sellier & Bellot Vlašim (08.08.2021, 17:00)
Rozhodčí: Marek Radina – Milan Flimmel, Alexandr Černoevič
Delegát utkání: Jiří Neuberg
Delegát svazový: Jan Král